Use of volumetric absorptive microsampling (VAMS) for the quantification of novel blood markers of EAAS doping

Il microcampionamento mediante Volumetric Absorptive Microsampler (VAMS) è una recente tecnica di campionamento, utilizzata per ottenere campioni essiccati di fluidi biologici, che potrebbe rappresentare nel prossimo futuro una valida alternativa al prelievo di urina, sangue intero e siero al fine di analisi anti-doping. Sebbene simili ai Dried Blood Spots (DBS), i VAMS si differenziano da essi per una serie di vantaggi significativi: i) miglioramento delle prestazioni quantitative grazie al volume di campione più preciso; ii) recupero in fase di estrazione e riproducibilità non dipendenti dall'ematocrito (HCT); iii) migliore correlazione con valori plasmatici; iv) semplificazione delle procedure di raccolta; v) disponibilità del formato a 96 pozzetti, che aprono l'accesso all'automazione. In questo studio, sarà valutata l’idoneità dei VAMS, nel formato 30μL, come supporto innovativo per il dosaggio di nuovi marcatori ematici del doping con steroidi androgeni anabolizzanti pseudoendogeni (EAAS). Sarà sviluppato un metodo UHPLC-MS/MS per la quantificazione di un panel significativo di ormoni steroidei circolanti e dei loro metaboliti di fase II. I parametri e le transizioni della spettrometria di massa così come le condizioni cromatografiche saranno messi a punto per ottenere la massima sensibilità ed il miglior compromesso tra risoluzione e tempo di analisi. Inoltre, la validazione sarà eseguita seguendo i requisiti della World Anti-Doping Agency (WADA). Il metodo sviluppato sarà poi trasferito in un laboratorio accreditato presso la WADA e sarà effettuato un confronto inter-laboratorio. Infine, i risultati saranno discussi ponendo particolare enfasi sul confronto sistematico con le matrici ematologiche convenzionali, come siero e plasma.