A NEXT GENERATION DNA VACCINE CODING FOR IMMUNODOMINANT SEQUENCES OF ALPHA-ENOLASE TO CURE PANCREATIC CANCER

L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDA) è ancora un bisogno medico urgente con pochi progressi nella terapia e nella sopravvivenza del paziente. Mediante un approccio proteomico abbiamo identificato l'antigene associato al tumore (TAA) alfa-enolasi (ENO1), un enzima glicolitico sovraespresso nel PDA che agisce anche come recettore del plasminogeno, come bersaglio immunologico per l'immunoterapia PDA. Poiché ENO1 supporta la proliferazione anaerobica, promuove l'invasione tumorale e suscita una risposta umorale e cellulare nei pazienti, abbiamo sviluppato un vaccino a DNA plasmidico non integrante che codifica per l’intera sequenza di ENO1 umana (vaccino a DNA FL-ENO1) che ha ritardato efficacemente la progressione tumorale nei topi ingegnerizzati che spontaneamente sviluppano PDA (topi KC e KPC), e ancora di più in combinazione con la chemioterapia. Il vaccino a DNA FL-ENO1 induce una forte risposta immunitaria antitumorale coordinata che è associata a un ridotto afflusso di cellule T regolatorie e cellule soppressorie di derivazione mieloide (MDSC) nel sito tumorale. Questi dati supportano l'idea che la vaccinazione per ENO1 rappresenti una terapia efficace per prevenire la ricidiva del PDA o ridurre il carico tumorale. Tuttavia, il vaccino a DNA FL-ENO1 non ha sradicato completamente il PDA, poiché nei topi KC e KPC vaccinati, MDSC e cellule T regolatorie si sono ripresentate con conseguente ricomparsa di tumore. Per ottimizzare il vaccino per ENO1, le tre sequenze più immunogeniche di ENO1 sono state identificate e clonate nel plasmide pVax approvato per l’uso clinico (vaccino ENO3PEP). La domanda di brevetto di questo vaccino di nuova generazione è stata depositata nel settembre 2021 (MSE, IT n. IT102021000024779). I nostri dati preliminari hanno mostrato che le sequenze ENO3PEP hanno indotto una maggiore proliferazione delle cellule T e un maggiore rapporto di IFNg/IL10 secreto dalle cellule T dei donatori sani e dei pazienti con PDA, rispetto al vaccino a DNA FL-ENO1. Inoltre, nei topi KPC, il vaccino ENO3PEP ha indotto una maggiore i) riduzione delle lesioni tumorali pancreatiche, ii) produzione di IgG anti-ENO1, iii) secrezione di IFNg da parte delle cellule T stimolate con ENO1 e iv) infiltrazione delle cellule T CD8+ nel sito del tumore rispetto al vaccino a DNA FL-ENO1. Questo progetto mira alla validazione di ENO3PEP come vaccino a DNA di seconda generazione idoneo per l'immunoterapia praticamente in tutti i pazienti affetti da PDA. Ciò sarà ottenuto mediante: i) analisi fenotipica, funzionale e trascrizionale della risposta indotta da ENO3PEP nei linfociti di pazienti affetti da PDA; ii) valutazione degli effetti della vaccinazione a DNA ENO3PEP in modelli murini di PDA in termini di crescita tumorale, risposta immunitaria e modificazioni del microambiente tumorale; iii) studi di tossicologia e biodistribuzione che impiegano un lotto di vaccino ENO3PEP simile a una buona pratica di fabbricazione (GMP). Si prevede una risposta immunitaria antitumorale sicura, maggiore e duratura indotta dal vaccino ENO3PEP rispetto al vaccino FL-ENO1 insieme a un sostanziale passo avanti verso l'industrializzazione con un aumento del livello di prontezza tecnologica (da 4 a 6-7). Il nostro progetto mira ad affrontare un'importante sfida relativa alla salute, il PDA, riunendo conoscenze e tecnologie attraverso competenze di base e cliniche. Il completamento di questo programma consentirà di raccogliere dati per il deposito dell'autorizzazione allo studio clinico first-in man e renderà il vaccino ENO3PEP in attesa di brevetto più attraente per gli investitori